【代怀生男孩】
试管婴儿，并不是在试管中长大的婴儿，只是使原本发生在人体内输卵管处的自然受精过程改由在体外试管环境中进行，因此得名“试管婴儿”。
从20世纪60年代，世界上第一个体外受精研究中心成立，到1988年我国大陆地区第一个试管婴儿诞生，再到如今越来越多的夫妇通过试管婴儿技术生出他们自己的宝宝，一路走来，试管婴儿技术发展的背后是无数科学家们的艰辛付出。张丽珠便是其中之一。
张丽珠
张丽珠，中国著名妇产科医学专家、北京大学第三医院妇产科创始人之一、生殖医学中心名誉主任、中国大陆首例试管婴儿缔造者。
今天是张丽珠教授百岁诞辰纪念日，谨以此文纪念先生。
二十世纪七八十年代，作为妇产科医师的张丽珠接触了大量不孕不育症患者。她明白不孕不育的痛苦和无奈，深知这直接关系着人们的身体健康和家庭乃至社会和谐。为了在临床上解除这些患者的困扰，她在生殖内分泌实验室开展工作的同时，一直很关注国内外的相关研究发展。
试管婴儿技术的出现，让她看到了解决问题的途径。
试管婴儿技术即体外受精-胚胎移植（In Vitro Fertilization and Embryo Transfer，IVF-ET）。1978年，英国剑桥大学的生理学家爱德华兹应用试管婴儿技术，迎来了路易斯·布朗的诞生。随后，试管婴儿技术在国际上引起强烈反响。
随着试管婴儿技术的影响越来越大，张丽珠意识到了这一技术在临床上对病患的巨大价值以及在研究上的广阔前景。因此，她一方面在国外考察时开始注意相关技术，另一方面开始积极搜集相关文献资料。
张丽珠想在国内展开研究试管婴儿技术，除了要面对缺少技术、设备、资源的支撑外，还需要克服人们在思想认识上存在的误区。出于作为医师治病救人的责任感和作为母亲将心比心的悲悯情怀，她于1982年决定开展试管婴儿的研究工作。此时，张丽珠61岁。
在了解了关于IVF-ET的基础知识后，张丽珠组织妇产科的同事和研究生们，与北医基础医学院组织胚胎教研室一起开展相关的研究。
她根据国人体质情况采取边治病边取卵的方法，将西方腹腔镜取卵的方法改为开腹取卵，即使取不到卵也能帮患者治疗结核导致的输卵管阻塞问题。
行医条件非常艰苦，没有科研经费、缺少仪器设备，他们只能在一间不足10平方米的小屋里开展实验。取卵针头磨秃了就拿去重磨，一个试管要冲洗上百遍；由于缺少恒温箱且卵子存活时间很短，取出卵泡液后，她便将试管放入保温桶一路小跑到组织胚胎室。
张丽珠在工作中
从1986开始，张丽珠进行胚胎移植工作，先后失败了12次。期间也曾有外国专家应国家有关部门邀请来到北京，给十几对中国年轻夫妇应用试管婴儿技术，结果却无一例成功。但这些都没能动摇张丽珠的决心。
1987年6月，她迎来了第13位受试者郑桂珍。
郑桂珍因为输卵管阻塞，结婚20年来饱尝无法生育之苦。当她找到张丽珠求医时，已38岁了。
经过初步检查，张丽珠发现患者的卵不多、质量不好、子宫内膜的条件也不太好。女子最适宜的怀孕年龄在25岁到30岁之间。之前的12例胚胎移植手术，很多母亲自身条件很好，都没有成功。但在郑桂珍夫妇的再三恳求下，张丽珠还是决定试一试。
1987年6月26日，张丽珠在郑桂珍子宫内移植了4个胚胎。后来，其中3个胚胎自然萎缩，剩下的那个胚胎开始正常发育，患者出现了早孕反应。
胚胎移植成功后，大家终于看到了成功的曙光。张丽珠说：“孕育生命，实在是一件复杂而神奇的事……说实话，我并不知道这一次能够成功，虽然每一次，我都尽了百分之百的努力。”
随着预产期的临近，考虑到产妇年龄过大，为了防止合并症，加上胎儿非常宝贵，张丽珠决定亲自给她实施剖宫产手术。
1988年3月10日，北医三院妇产科产房外围满了闻讯而来的媒体记者。8时56分，人们终于等到了期待已久的新生婴儿啼哭声。
手术室内，张丽珠亲手拭净了新生儿身上的污物，检查无异常后，微笑着抱起了这个孩子，并深情地低头凝视这个新生命。
这是个女孩，她的父母为她取的名字叫“郑萌珠”，既含有初次、第一例的意思，又表达了对张丽珠的感谢。
张丽珠与首例试管婴儿
走出手术室，中央电视台的记者提问说：“张教授，我国为什么要进行试管婴儿的研究？”
张丽珠回答：“试管婴儿的工作并不是只多生几个孩子的问题，它有深远的科学意义，而且代表了一个国家或者某一个地区的科学技术水平。试管婴儿成功，可以带动很多的研究，比如说，我们对于生殖医学、生殖过程更深入的了解，而且对于遗传学、免疫学，还有早期胚胎学都可以带动起来。这样的话，我们可以进一步为计划生育和优生学服务，所以它的意义是很大的。当然，对于不孕症的妇女来说，这也是一个治疗措施。”
随后，张丽珠带领团队进行试管婴儿周期1300多次，使临床妊娠率从早期的6.4%上升至32%，活婴率达到20%，中国在这一技术上的成绩进入国际先进行列。
在她的努力下，我国相继培育了首例赠卵试管婴儿、首例冷冻胚胎试管婴儿等，各个环节的技术也得到了迅速发展。
张丽珠
（1921.1-2016.9）
妇产科医学专家
文：采集工程项目办公室/中国科协创新战略研究院
参考资料：
1.《妙手握奇珠——张丽珠传》，王传超，陈丽娟，中国科学技术出版社，上海交通大学出版社
2.本文图片来源于老科学家学术成长资料采集工程
ELISA样本制备指南及注意事项
0
1
定义及介绍
ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。
样本制备指南
1
血清
全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品
找人代怀生孩子
2.血浆
抗凝剂推荐使用EDTA-Na
2，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。
3组织匀浆/组织全蛋白
用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。
其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。
4.细胞提取液
贴壁细胞
用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；
悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10
6个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。
其余方法：
对于
贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。
对于
悬浮细胞：离心收集细胞，以2×10
6细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10
5细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
5.细胞培养上清或其他生物体液
收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。
实验细节与注意事项
0
1
收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。
0
2
样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
0
3
试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
04
检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。
对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：
稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；
稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；
稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；
每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
05
若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
06
若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
07
某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
08
对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。
【代怀生男孩】
试管婴儿，并不是在试管中长大的婴儿，只是使原本发生在人体内输卵管处的自然受精过程改由在体外试管环境中进行，因此得名“试管婴儿”。
从20世纪60年代，世界上第一个体外受精研究中心成立，到1988年我国大陆地区第一个试管婴儿诞生，再到如今越来越多的夫妇通过试管婴儿技术生出他们自己的宝宝，一路走来，试管婴儿技术发展的背后是无数科学家们的艰辛付出。张丽珠便是其中之一。
张丽珠
张丽珠，中国著名妇产科医学专家、北京大学第三医院妇产科创始人之一、生殖医学中心名誉主任、中国大陆首例试管婴儿缔造者。
今天是张丽珠教授百岁诞辰纪念日，谨以此文纪念先生。
二十世纪七八十年代，作为妇产科医师的张丽珠接触了大量不孕不育症患者。她明白不孕不育的痛苦和无奈，深知这直接关系着人们的身体健康和家庭乃至社会和谐。为了在临床上解除这些患者的困扰，她在生殖内分泌实验室开展工作的同时，一直很关注国内外的相关研究发展。
试管婴儿技术的出现，让她看到了解决问题的途径。
试管婴儿技术即体外受精-胚胎移植（In Vitro Fertilization and Embryo Transfer，IVF-ET）。1978年，英国剑桥大学的生理学家爱德华兹应用试管婴儿技术，迎来了路易斯·布朗的诞生。随后，试管婴儿技术在国际上引起强烈反响。
随着试管婴儿技术的影响越来越大，张丽珠意识到了这一技术在临床上对病患的巨大价值以及在研究上的广阔前景。因此，她一方面在国外考察时开始注意相关技术，另一方面开始积极搜集相关文献资料。
张丽珠想在国内展开研究试管婴儿技术，除了要面对缺少技术、设备、资源的支撑外，还需要克服人们在思想认识上存在的误区。出于作为医师治病救人的责任感和作为母亲将心比心的悲悯情怀，她于1982年决定开展试管婴儿的研究工作。此时，张丽珠61岁。
在了解了关于IVF-ET的基础知识后，张丽珠组织妇产科的同事和研究生们，与北医基础医学院组织胚胎教研室一起开展相关的研究。
她根据国人体质情况采取边治病边取卵的方法，将西方腹腔镜取卵的方法改为开腹取卵，即使取不到卵也能帮患者治疗结核导致的输卵管阻塞问题。
行医条件非常艰苦，没有科研经费、缺少仪器设备，他们只能在一间不足10平方米的小屋里开展实验。取卵针头磨秃了就拿去重磨，一个试管要冲洗上百遍；由于缺少恒温箱且卵子存活时间很短，取出卵泡液后，她便将试管放入保温桶一路小跑到组织胚胎室。
张丽珠在工作中
从1986开始，张丽珠进行胚胎移植工作，先后失败了12次。期间也曾有外国专家应国家有关部门邀请来到北京，给十几对中国年轻夫妇应用试管婴儿技术，结果却无一例成功。但这些都没能动摇张丽珠的决心。
1987年6月，她迎来了第13位受试者郑桂珍。
郑桂珍因为输卵管阻塞，结婚20年来饱尝无法生育之苦。当她找到张丽珠求医时，已38岁了。
经过初步检查，张丽珠发现患者的卵不多、质量不好、子宫内膜的条件也不太好。女子最适宜的怀孕年龄在25岁到30岁之间。之前的12例胚胎移植手术，很多母亲自身条件很好，都没有成功。但在郑桂珍夫妇的再三恳求下，张丽珠还是决定试一试。
1987年6月26日，张丽珠在郑桂珍子宫内移植了4个胚胎。后来，其中3个胚胎自然萎缩，剩下的那个胚胎开始正常发育，患者出现了早孕反应。
胚胎移植成功后，大家终于看到了成功的曙光。张丽珠说：“孕育生命，实在是一件复杂而神奇的事……说实话，我并不知道这一次能够成功，虽然每一次，我都尽了百分之百的努力。”
随着预产期的临近，考虑到产妇年龄过大，为了防止合并症，加上胎儿非常宝贵，张丽珠决定亲自给她实施剖宫产手术。
1988年3月10日，北医三院妇产科产房外围满了闻讯而来的媒体记者。8时56分，人们终于等到了期待已久的新生婴儿啼哭声。
手术室内，张丽珠亲手拭净了新生儿身上的污物，检查无异常后，微笑着抱起了这个孩子，并深情地低头凝视这个新生命。
这是个女孩，她的父母为她取的名字叫“郑萌珠”，既含有初次、第一例的意思，又表达了对张丽珠的感谢。
张丽珠与首例试管婴儿
走出手术室，中央电视台的记者提问说：“张教授，我国为什么要进行试管婴儿的研究？”
张丽珠回答：“试管婴儿的工作并不是只多生几个孩子的问题，它有深远的科学意义，而且代表了一个国家或者某一个地区的科学技术水平。试管婴儿成功，可以带动很多的研究，比如说，我们对于生殖医学、生殖过程更深入的了解，而且对于遗传学、免疫学，还有早期胚胎学都可以带动起来。这样的话，我们可以进一步为计划生育和优生学服务，所以它的意义是很大的。当然，对于不孕症的妇女来说，这也是一个治疗措施。”
随后，张丽珠带领团队进行试管婴儿周期1300多次，使临床妊娠率从早期的6.4%上升至32%，活婴率达到20%，中国在这一技术上的成绩进入国际先进行列。
在她的努力下，我国相继培育了首例赠卵试管婴儿、首例冷冻胚胎试管婴儿等，各个环节的技术也得到了迅速发展。
张丽珠
（1921.1-2016.9）
妇产科医学专家
文：采集工程项目办公室/中国科协创新战略研究院
参考资料：
1.《妙手握奇珠——张丽珠传》，王传超，陈丽娟，中国科学技术出版社，上海交通大学出版社
2.本文图片来源于老科学家学术成长资料采集工程
ELISA样本制备指南及注意事项
0
1
定义及介绍
ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。
样本制备指南
1
血清
全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品
找人代怀生孩子
2.血浆
抗凝剂推荐使用EDTA-Na
2，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。
3组织匀浆/组织全蛋白
用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。
其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。
4.细胞提取液
贴壁细胞
用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；
悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10
6个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。
其余方法：
对于
贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。
对于
悬浮细胞：离心收集细胞，以2×10
6细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10
5细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。
5.细胞培养上清或其他生物体液
收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。
实验细节与注意事项
0
1
收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。
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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
04
检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。
对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：
稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；
稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；
稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；
每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。
05
若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
06
若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
07
某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。
08
对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。
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